根据我国统计数据显示[1-2],我国胃癌的发病率位居第二,且80%的病例在初诊断时就已是进展期,因此,在胃癌防治方面我国面临非常严峻的形势[3-4]。当前胃癌发病机制并不完全明确,一般认为胃癌的发生和发展涉及多基因、多阶段、多因素的参与,是一个比较复杂的发展过程,而且常伴随凋亡蛋白、抑癌基因失活以及癌基因激活等多方面因素。有研究推测胃癌的多阶段癌变理论是从慢性萎缩胃炎到肠上皮化生最后进展成为胃癌[5]。目前临床上胃癌的相关生物学过程和各种生物学指标为胃癌的临床诊断与靶向治疗提供了一定参考。本研究将探讨豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物蛋白(MARCKS)、人类表皮生长因子受体2(HER2)与胃癌患者临床病理特征的相关性。
1 资料与方法 1.1 一般资料2018年3月到2021年3月,将我院收治的60例胃癌患者定为观察组,在同时期选取60例良性胃部肿瘤患者定为对照组。纳入标准:所有患者均通过病理诊断确诊;临床资料完整;所有患者对本研究知情,并签署同意书;本研究经我院伦理委员会批准。排除标准:营养不良患者;合并代谢疾病患者;患有感染性疾病;合并严重重要脏器障碍的患者;合并其他恶性肿瘤者。
1.2 方法两组患者均于本院消化内科内镜中心进行胃黏膜活检,医生采用活检钳从胃镜镜身专用孔道插入,取胃黏膜组织,将一部分胃黏膜组织送去病理诊断。另一部分胃黏膜组织采用免疫组化监测其中MARCKS和HER2表达水平。具体方法如下:采用切片机将蜡块切成厚度4μm石蜡切片,放置于70℃烤箱中烤2h后在二甲苯中脱蜡30min,再依次浸入100%、95%、90%、80%的酒精中水化,各5min,然后置于双蒸水中30min。石蜡切片放置柠檬酸钠抗原修复液中后经微波炉煮沸2min,自然冷却后放于3%过氧化氢酶中避光孵育30min,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗3次后滴加非免疫羊血清孵育1h,甩掉羊血清后滴加一抗稀释液(MARCKS一抗稀释浓度为1∶100,HER2一抗稀释浓度为1∶400)4℃孵育过夜,PBS孵育作为阴性对照。PBS洗3次后滴加二抗37℃孵育30min。PBS洗3次后,滴加显色液进行阳性细胞染色,双蒸水洗涤后,滴加苏木素进行细胞核染色,流水反蓝后,依次采用80%、90%、95%、100%的酒精进行脱水,各5min,二甲苯透明,干燥后采用中性树脂封片。
1.3 评价标准采用显微镜高倍镜观察染色强度及染色面积。MARCKS主要在细胞质中表达,HER2主要在细胞膜上表达,评分标准为:阳性细胞的染色为黄色或者褐色,无色为0分,浅黄色为1分,黄色为2分,褐色为3分;染色面积0~为0分,5%~为1分,25%~为2分,50%~为3分,75%~为4分。按照染色强度和面积进行综合评分,二者之和≥4分为阳性表达,0~3分为阴性表达[6]。
1.4 统计学方法采用统计学软件SPSS 23.0统计分析,计数资料采用n/%表示,进行χ2检验;符合正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较采用t检验;采用Spearman相关分析方法分析MARCKS、HER2与胃癌患者临床病理特征的相关性;以P<0.05表示差异显著。
2 结果 2.1 一般资料两组患者一般资料对比无明显差异(P>0.05),具有可比性。见表 1。
与对照组相比,观察组患者MARCKS、HER2阳性率均明显更高(P<0.05)。见表 2。
观察组中,MARCKS、HER2阳性和阴性表达患者性别、年龄、肿瘤大小比较无差异(P>0.05),而TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度与MARCKS和HER2表达呈正相关(P<0.05)。见表 3~4。
胃癌早期一般无明显症状,而至发现时,大多数患者已发展到晚期,因而通过手术已无法治愈。因此,为了对胃癌早期患者进行有效诊断,寻找判定早期胃癌的相关指标意义重大。MARCKS是一种在大脑中高度表达的内在非结构化蛋白质,具有丰富的生物学功能,与恶性肿瘤的发生、发展密切相关[6-7]。HER2是一种原癌基因,定位于染色体17q21区域,编码酪氨酸蛋白,主要作用是促进细胞分裂,促进蛋白水解酶分泌等。HER2促进肿瘤细胞的发生发展是通过激活PI3K信号通路实现的。HER2与多种癌症的发生发展与密切联系,HER2表达水平越高,癌症进程越快,在各种癌症的治疗过程中,HER2也是一个独立预后指标。在正常细胞中,HER2表达水平较低,而20%~35%癌症细胞,HER2存在过度表达[8]。
本研究结果表明,与对照组相比,观察组患者MARCKS、HER2阳性率均明显更高。卵巢癌、急性脑缺血患者体内MARCKS水平均明显升高,而且阳性表达率明显高于健康人群[9],与本研究结果相符。对HER2乳腺癌患者进行10年跟踪报道发现,其阳性者生存率仅为43%,而阴性者为90%[10]。究其原因主要是因为在阳性患者中,其肿瘤侵袭性更强,早期极易出现转移的情况,从而导致癌细胞增殖分化,该结果与本研究具有一定相似性。
本文进一步分析发现,观察组中,MARCKS、HER2阳性与阴性患者性别、年龄、肿瘤大小比较无明显差异(P>0.05),而TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度差异有统计学意义;Spearman相关分析显示,性别、年龄、肿瘤大小与MARCKS和HER2不相关,TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度与MARCKS和HER2呈正相关。该结果表明,MARCKS、HER2蛋白有可能参与了胃癌的发生发展。对上皮性卵巢癌组织中MARCKS表达及相关性研究发现,患者的临床分期、淋巴结转移情况与MARCKS表达具有明显相关性[11]。另有研究发现[12],在宫颈癌患者,HER2中呈现高表达,属于宫颈癌的预后独立因素。当前研究中虽然对胃癌与MARCKS和HER2单独的关系有一些研究[13-15],但是对两者相结合的研究还比较少,因此,本研究可对MARCKS、HER2与胃癌的相关性提供一定的理论参考。但本研究存在一定的缺陷,如病例数过少,未进一步从细胞、分子层面上进一步揭示MARCKS、HER2蛋白参与胃癌发生发展的机制,因此对于二者是否发挥协同效果促进胃癌细胞的增殖与转移尚不明确,因而在后续研究中,我们将进一步深入细胞、分子层面的研究,以期揭示二者参与胃癌发生发展的具体机制。
利益冲突:所有作者均申明不存在利益冲突。
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