紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum spreng)系菊科泽兰属多年生半灌木草本植物，是我国首位的外来入侵植物，它侵占农田、果园、林地，与农作物争水、争肥、争阳光和空间。其可堵塞水渠，阻碍交通，危害畜牧业，对农业生产及环境生态的危害性极大。为了防控紫茎泽兰的传播蔓延，保护生态环境，人们对紫茎泽兰进行了开发利用^[1-3]。紫茎泽兰羟基泽兰酮(Euptox A)是从紫茎泽兰中分离出的化合物，具有很好的杀虫及抑菌效果，可作为一类较好的生物农药资源进行开发利用^[4-6]。但是，紫茎泽兰作为一种有毒杂草，牲畜食用后会导致肝、肾毒性^[7]。因此，其对于人类健康的影响也不容忽视。为此，我们对Euptox A进行了系统的毒理学研究^[8-10]。本实验通过研究大鼠静脉给予Euptox A的毒代动力学与组织分布，揭示Euptox A在动物体内的动态变化规律，为紫茎泽兰的安全利用提供理论依据。

1100系列高效液相色谱仪，包括G1311A四元泵、G1379A在线脱氧机、G1316A柱温箱、G1315BDAD检测器和G1313A进样器，美国Agilent公司；AB204-A电子分析天平，梅特勒-托利多上海仪器公司；高速离心机，美国Thermo Fisher Scientific公司；Euptox A标准品室温下呈浅黄色固体，不溶于水，由中国农业科学院植物保护研究所提供，纯度99%。实验时用注射用大豆油为溶剂，配制后的Euptox A溶液经0.22 μm无菌滤膜过滤后备用。

健康Wistar雄性大鼠33只，体质量240~260g，由山东大学实验动物中心提供，动物许可证号为：SCXK (鲁)2012-0001。饲养环境：室温20.0℃~23.0℃，相对湿度为45%~55%。实验动物房合格证号：SYXK(鲁)2011-0001号。

健康雄性Wistar大鼠15只，随机分为3组，每组5只，以尾静脉给药的方式，一次性静脉给予Euptox A 25、50和100mg·kg^-1。各组分别于给药前和给药后5、10、15、20、30、45、60、90、120、180、270和360min于颈静脉窦处取血0.25mL，肝素抗凝，1000g离心10min，取血浆，-20℃冰箱保存备用。

健康雄性Wistar大鼠18只，随机分为3组，每组6只，以尾静脉给药的方式，一次性静脉给予Euptox A 50mg·kg^-1。分别于静脉给药后10、60和120min处死大鼠，迅速取其心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肠、睾丸和肌肉组织，用生理盐水将组织样品冲洗去除残留物，滤纸吸干，准确称量一定的质量，加入4倍生理盐水，制成20%的组织匀浆，1000g离心10min, 取上清放置于-20℃冰箱保存备用。

取100μL血浆或组织样品加100μL乙腈混匀，8708g离心5min, 取上清100μL加400μL流动相稀释混匀，经0.45μL滤膜过滤后进样20μL测定。取空白血浆及组织样品配成1、5、10、20、40、60、80、100mg·L^-1的Euptox A标准系列溶液，经预处理后记录色谱图及峰面积，以Euptox A浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，计算出标准曲线方程

采用1100系列高效液相色谱仪测量生物样品中Euptox A浓度。色谱柱SB-C18 (250mm×4.6mm, 5.0μm)，流动相为甲醇: 水=60 ∶40(v/v)，流速为0.8mL·min^-1，进样量20μL，检测波长为255nm，190~400nm波段全扫描。

实验数据采用x±s表示，采用DAS 2.0药代动力学智能分析软件对所测数据进行分析，计算毒代动力学参数。

本实验前期已按照《化学药物非临床毒代动力学研究技术指导原则》完成Euptox A在大鼠全血中含量的方法学验证。大鼠全血空白杂质对检测无干扰，Euptox A在2~2000 μg·L^-1范围内线性关系良好，Euptox A在20、200、2000 μg·L^-1的精密度均＜15%，日内和日间准确度在85%~115%之间，回收率为90.4%~109.1%，符合生物样品定量测定要求。

Euptox A色谱图峰形良好，分离完全，心、肝、脾、肺、肾、脑、胃等各组织杂质对检测无干扰，样品于室温放置12h及-20℃放置1周稳定，精密度均＜15%，准确度在85%~115%之间，回收率为93.8%~104.7%。结果表明本实验方法符合生物样品分析指导原则的要求，具有较高的专属性。以Euptox A浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得标准曲线方程。见表 1。

表 1

表 1 大鼠组织中紫茎泽兰羟基泽兰酮(Euptox A)的校正标准曲线和相关系数 样品 标准曲线 相关系数(R2) 血浆 Y=29858.61X+6257.67 0.9999 心 Y=28892.54X+5814.33 0.9997 肝 Y=29968.73X+7683.52 0.9999 脾 Y=29984.14X+7153.27 0.9999 肺 Y=27362.91X+4736.81 0.9996 肾 Y=27394.16X+2861.46 0.9996 脑 Y=26913.27X+5631.82 0.9995 胃 Y=27183.68X+3962.73 0.9996 睾丸 Y=27135.44X+6836.52 0.9994 肌肉 Y=27463.38X+3761.82 0.9995

表 1 大鼠组织中紫茎泽兰羟基泽兰酮(Euptox A)的校正标准曲线和相关系数

大鼠静脉给予Euptox A后，Euptox A的毒代动力学符合线性毒代动力学特点。大鼠单次静脉给予Euptox A 25、50和100 mg·kg^-1后，5min血药浓度达到最高值分别为(2.57±0.60)、(5.83±0.94)和(10.72±2.08)mg·L^-1，60min血药浓度已降至峰浓度的1/10~1/5；消除半衰期分别为(27.4±6.7)、(21.6±5.4)和(18.3±5.8)min；AUC分别为(2039.4±835.3)、(4277.2±1194.6)和(7842.7±1077.8)mg·min^-1·L^-1；清除率无明显差异，表明在给药范围内无消除饱和现象。见图 1、表 2。

图 1

图 1 大鼠静脉给予Euptox A后的血药浓度-时间曲线(x±s，n=5)

表 2

表 2 大鼠静脉给予Euptox A的主要毒代动力学参数(x±s，n=5) 参数 Euptox A/mg·kg-1 25 50 100 t1/2/min 27.4±6.7 21.6±5.6 18.3±5.8 cmas/ mg·L-1 2.57±0.60 5.83±0.94 10.72±2.08 v/L·kg-1 4.6±1.4 3.9±1.1 3.1±0.8 cl/L·min-1·kg-1 0.24±0.08 0.32±0.05 0.39±0.11 AUC(0-t)/mg·min-1·L-1 2039.4±835.3 4277.2±1194.6 7842.7±1077.8 AUC(0-∞)/mg·min-1·L-1 2474.6±991.8 5274.6±1359.1 9824.7±1446.2   注：t1/2消除半衰期；cmas：最大血药浓度；v：表观分布容积；cl；清除率；AUC: 药时曲线下面积。

表 2 大鼠静脉给予Euptox A的主要毒代动力学参数(x±s，n=5)

大鼠静脉给予Euptox A 50mg·kg^-1后，在血液、心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、睾丸和肌肉组织中均有分布，以血液、肝和心较高，给药后10min达到最高值，60min后显著下降，Euptox A在大鼠各组织分布后，消除也较快，给药后120min各组织中的含量仅为给药后10min的1/15~1/7，说明Euptox A不会在组织中蓄积。见表 3。

表 3

表 3 大鼠静脉给予Euptox A 50mg·kg-1各组织中的分布(μg·g-1，x±s) 组织 时长/min 10 60 120 血浆 4.66±0.82 1.19±0.27 0.65±0.12 心 4.04±0.40 0.82±0.11 0.50±0.13 肝 4.35±0.83 0.89±0.16 0.60±0.16 脾 2.87±0.75 0.78±0.06 0.42±0.07 肺 2.25±0.89 0.70±0.09 0.32±0.07 肾 2.76±0.79 0.81±0.15 0.30±0.08 脑 1.71±0.63 0.54±0.15 0.18±0.06 胃 2.04±0.67 0.60±0.16 0.25±0.10 睾丸 1.67±0.44 0.37±0.07 0.12±0.05 肌肉 2.79±0.75 0.54±0.09 0.17±0.04

表 3 大鼠静脉给予Euptox A 50mg·kg-1各组织中的分布(μg·g-1，x±s)

紫茎泽兰作为具有毒性的一类外来入侵植物，大面积及高密度是其入侵过程中最为显著的特征。随着其研究深入，发现紫茎泽兰叶片提取物Euptox A在抑菌及杀虫中具有较好的作用。但是，其可导致动物肝脏损伤^[11]。目前，还未见对Euptox A相关毒代动力学及组织分布的研究。

本文结果显示，Euptox A最大血药浓度与给药剂量呈良好的线性关系，平均消除半衰期最长约30 min，清除率为0.24~0.39 L·min^-1·kg^-1。提示，在本研究剂量范围内，Euptox A在体内代谢转化较快，具有吸收快及清除快的特点。在大鼠静脉给予Euptox A 50 mg·kg^-1后，Euptox A在所测定的各组织中均有分布，给药10 min后各组织中的含量达最高，然后逐渐下降，120 min后大部分组织含量降至较低。Euptox A在大鼠脑和睾丸中均可测出，说明Euptox A通过血脑屏障和血睾屏障，可能与其相对分子量较小有关。有研究发现，紫茎泽兰草粉对小鼠睾丸精母细胞染色体畸变率未见明显影响，这可能由于紫茎泽兰相关提取物在睾丸中浓度较低，且消除较快，以上特征与本研究中Euptox A相似。Euptox A在血浆中含量较高，谢鹏等^[12]研究发现，Euptox A可诱发小鼠血液感染性损伤。同时我们发现心脏和肝脏中Euptox A含量较高，这可能由于该组织器官血流丰富。叶妍琳等^[13]发现，紫茎泽兰中毒马匹的谷丙转氨酶、谷草转苷酶、碱性磷酸水平显著升高，而肌酐水平下降，紫茎泽兰中毒会对马的肝脏以及肾脏功能产生损伤；董强等^[14]同样发现，紫茎泽兰全草对小鼠肝脏、肾脏有中等毒性，但以上研究均未证实紫茎泽兰中何种物质可造成肝脏损伤。基于以上研究，我们课题组进一步通过亚慢性毒性实验发现，Euptox A对小鼠肝脏有较强的毒性作用。

通过研究Euptox A在大鼠体内的毒代动力学和组织分布特征，揭示其代谢规律及分布特征，为Euptox A的进一步开发利用提供毒性评价相关的科学依据。

利益冲突：所有作者均申明不存在利益冲突。