抑郁症是以情绪低落、思维迟缓、意志行为减退为主要症状的一种常见精神障碍，而快感缺失亦为其核心症状。在DSM-5抑郁症诊断标准中，对快感缺失描述为在一天中大部分时间对平日感兴趣的活动丧失兴趣或愉快感[1]。导致抑郁症快感缺失症状的生物学机制不明确，研究者试图从神经解剖学研究、炎症机制及分子遗传学研究等角度探讨其生物学机制，其中遗传学机制具有重要作用。解剖学研究表明，中脑边缘系统的多巴胺能神经通路的功能异常是抑郁症快感缺失及动机缺乏的病理基础，而对于快感缺失的遗传学机制的研究较少[2-3]。多巴胺D3受体基因(DRD3)，位于3号染色体长臂1区3带3亚带(3q13.3)，其编码序列由6个外显子和5个内含子构成。在DRD3基因多态性的研究中，对rs6280(Ser/Gly)多态性的研究是最广泛的。该多态位点位于第1外显子，在mRNA第9密码子中腺嘌呤(A)被鸟嘌呤(G)替代，可致D3受体胞外N-末端的丝氨酸(Ser)变为甘氨酸(Gly)，进而影响D3受体的活性，称作“Ser9Gly”多态性[4]。目前有关DRD3Ser9Gly多态性(rs6280) 与快感缺失直接相关性的研究较少，本研究旨在探讨DRD3rs6280基因多态性与抑郁症快感缺失之间的关联性，为研究抑郁症快感缺失的遗传机制提供一定的理论依据。
1 对象与方法 1.1 对象观察组来源于2016年3月1日至2016年10月30日在济宁医学院第二附属医院(济宁市精神病防治院)住院治疗的抑郁症患者。入组标准：1) 符合DSM-5中抑郁症的诊断标准，无抗抑郁药物治疗禁忌症，并由两名以上精神科主任医师分别确诊，确保诊断明确。2) 汉密尔顿抑郁量表 24项评分≥21分，且经快感缺失量表(SHAPS表)评定，分数≥3分。SHAPS总分为14分，当分数≥3分时，代表有快感缺失；当分数≥7分时，表示有重度快感缺失。3) 汉族，年龄在30~60岁之间。排除标准：1) 伴精神病性特征者。2) 产后抑郁症患者。3) 抑郁发作的首发年龄小于25岁。4) 存在双相情感障碍、自杀及边缘性人格障碍家族史。5) 复发性抑郁者4次以上者。6) 孕期或哺乳期妇女。7) 脑肿瘤、癫痫、脑外伤导致意识障碍超过5min、脑器质性疾病及其他神经系统疾病病史者。8) 合并任何精神活性物质滥用或依赖者(尼古丁除外)。9) 智力低下者。10) 文盲。观察组共105例，其中，女性80例，男性25例。平均年龄(44.72±8.58) 岁，受教育年限平均(8.14±3.11) 年。根据快感缺失程度高低再分组，其中，高程度快感缺失(≥7分)与低程度快感缺失(＜7分)分别为73例和32例。
对照组：选自2015年10月1日至2016年10月30日在社区或至济宁市第二附属医院健康体检的心身健康志愿者。入组标准：1) 性别、年龄、受教育年限与观察组相匹配。2) HAMD-24评分＜8分，且SHAPS＜3分。3) 无精神疾病史及家族史。排除标准:1) 神经系统检查有阳性体征，有严重的躯体疾病、颅脑外伤或其他神经系统疾病史。2) 有吸毒史及其他任何精神活性物质滥用史。共入组95例，其中女性66例，男性29例，平均年龄(45.99±6.65) 岁，受教育年限平均(7.67±2.79) 年。
观察组和对照组在性别和年龄、受教育年限方面统计学无差异(P＞0.05)，说明两组间一般人学资料相匹配，具有可比性。见表 1。
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表 1 两组一般人口学资料的比较 |
本研究经济宁医学院第二附属医院医学伦理委员会批准，所有受试者均被告知实验的目的、原因和方法，以及参加该项研究可能造成的不适和风险，所有受试者均为自愿参加，并签署知情同意书。
1.2 方法每位受试者抽取清晨空腹肘静脉血5ml于EDTA抗凝剂抗凝的真空采血管中。采用离心柱法对所采取的血液进行DNA提取，所用试剂为北京天根生物科技有限公司的中量血基因组DNA提取试剂盒。应用NanoDrop-2000分光光度计检测所提取DNA的浓度和纯度。根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)的PUBMED数据库提供的DRD3rs6280基因序列，运用引物设计软件premier 5.0进行引物设计。引物由上海生工生物科技有限公司合成，合成产物呈干粉状，稍离心后按要求加入一定量的双纯水。引物序列，上游引物：5'~3'AGGATGAGCGCGCAGTAGGA；下游引物：5'~3'ACCAAGCCCCAAAGAGTCTGA进行PCR扩增。PCR反应体系为30μl，反应条件为95℃预变性1min，95℃变性5s，53℃退火15s，72℃延伸20s，经35个循环，72℃最终延伸10min，4℃。用配制的经EB染色的1%琼脂糖凝胶电泳，应用markerD2000为分子量标准品检查各片段大小，分离20min后，利用紫外线荧光凝胶成像仪检测扩增结果，荧光凝胶在紫外线灯下显示出满意条带后，将剩余PCR扩增产物送公司测序。采用chromas软件读取基因型，基因型分别为CC、CT、TT。
1.3 统计学方法采用SPSS22.0统计学软件对数据进行处理分析，计量资料用均数±标准差表示。观察组和对照组的年龄、受教育年限等进行独立样本t检验，性别差异采用χ2检验；各组基因型与等位基因频数之间的比较用χ2检验，用Hardy-Weiberg平衡定律进行检测，查看是否具有较好的群体代表性；单因素多个独立样本采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)；设定P＜0.05差异有统计学意义。
2 结果 2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度检验观察组rs6280基因型分布(χ2=4.62，P=0.08)，正常对照组rs6280基因型分布(χ2=2.14，P=0.16)，两组基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P＞0.05)。表明本研究样本为完全随机样本，具有较好的群体代表性。
2.2 两组间DRD3rs6280基因型和等位基因的分布比较观察组与对照组rs6280各基因型分布和等位基因分布差异均无统计学意义。见表 2。
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表 2 观察组和对照组基因型与等位基因分布比较(n/%) |
不同基因型之间快感缺失SHAPS评分比较，采用单因素方差分析，结果显示，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 3。
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表 3 观察组间不同基因型SHAPS评分比较 |
结果显示，2组间基因型分布差异无统计学意义; 且2组间等位基因分布差异亦无统计学意义。见表 4。
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表 4 高、低快感缺失患者基因型与等位基因分布比较(n/%) |
抑郁症以显著而持久的心境低落为主要临床特征，同时又常伴有不同程度的快感缺失症状，抑郁情绪和快感缺失为抑郁症两大核心症状。研究表明，抑郁症的快感缺失与中枢多巴胺能神经通路的异常有关[2-3]。在中脑边缘系统中，尤其是伏隔核在奖赏系统中具有重要地位，有研究表明伏隔核内多巴胺(DA)浓度的下降将会导致个体对奖赏相关行为刺激反应性下降或对成瘾性物质的趋向性降低[5]。抑郁症快感缺失的存在和对奖赏刺激缺乏反应，常预示抑郁症治疗困难和预后欠佳，并且遗传学因素在抑郁症及抑郁症快感缺失的发生、发展中具有重要作用[6]。从D3受体的组织分布特点及功能可以看出，D3受体可能在抑郁症及奖赏系统及其在抑郁症快感缺失的发生发展上具有重要作用。研究表明[7]，多巴胺D3受体基因rs6280单核苷酸多态性参与奖赏相关DA的释放，并可能参与影响快感缺失症状，但是关于DRD3Ser9Gly多态性(rs6280) 与快感缺失直接相关性的研究较少。在DRD3基因多态性与快感缺失的研究中，有研究结果发现[7]，在抑郁症患者中，Gly等位基因携带者与Ser/Ser纯合子之间相比较，前者快感缺失更严重，其快感缺失程度经快感缺失量表评估。并且这种Gly等位基因与快感缺失之间的关系与临床前研究数据是一致的，即慢性应激和厌恶刺激使腹侧海马活动亢进，会诱发多巴胺系统电生理学(即多巴胺神经元的自发放电)和行为学(对精神兴奋剂的追求)明显的激活[8]。既往结合影像学研究DRD3Ser9Gly多态性与奖赏系统的相关性及奖赏系统脑区变化的结果表明，DRD3Ser9Gly错义突变会影响奖赏相关的纹状体中D3受体的结合，从而影响到多巴胺(DA)的释放，参与影响快感缺失症状。在Savitz等[7]对26个健康受试者和10名未服药的抑郁症患者研究中，受试者在完成感觉控制条件和不可预知的奖赏条件下，分别完成两组利用[11C]雷氯必利示踪法的正电子发射断层显像(PET)扫描，此方法目的是应用[11C]雷氯必利-PET成像检测在奖赏过程中DA释放的量。通过控制年龄、性别、诊断和自我报告的快感缺失后的相关回归分析显示，在收到不可预知的金钱奖励中，Gly等位基因携带者表现出了尾状核和腹侧纹状体D2/3受体结合减少，也就是说增加了与奖赏相关的DA的释放。
本文结果显示DRD3rs6280不同基因型之间的快感缺失无显著差异。并且当我们按照快感缺失程度的不同来进行分组比较时，结果显示高、低程度快感缺失组，基因型与等位基因的分布亦未见明显差异，这与Savitz[7]结果不同。Savitz结合影像学技术和基因多态性的研究中，显示Gly等位基因与快感缺失密切相关，并且参与影响奖赏相关的多巴胺的释放，影像学结果显示出纹状体对奖赏的反应性下降。其他对快感缺失或奖赏相关行为影像学的研究结果也表现出了相似的结果[9-11]。结合本文结果，虽未发现DRD3rs6280与抑郁症快感缺失的直接相关关系，但我们可以推测DRD3rs6280参与了与奖赏相关的多巴胺的释放，从而参与影响抑郁症的快感缺失。当然，抑郁症是一个多基因遗传疾病，同时受到环境、心理等因素影响。并且导致疾病发生可能由几个或多个遗传位点变异引起的，单一基因位点的变异不足以引起抑郁症的快感缺失症状。同时样本量大小及种族、地域的差异也会导致不同结果的出现。本研究不足之处在于样本含量较小，仍需扩大样本含量进一步研究。
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