2. 广东一方制药有限公司, 佛山 528244
2. Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd., Foshan 528244, China
半枝莲 (Scutellaria barbata D.Don) 为唇形科黄芩属植物，收载于2010年版一部《中国药典》。半枝莲全草入药，具有清热解毒、活血祛瘀、消肿止痛、抗癌等功能。性寒味酸，全草具有凉血解毒，散瘀止痛，消肿和清热利湿的功效[1]。半枝莲中主要含有黄酮类[2-5]、二萜类[6-9]、多糖等化合物，目前已有文献表明黄酮类化合物是半枝莲的主要有效成分[10-12]，其含量高低能够直接影响半枝莲的临床疗效。本文采集了半枝莲的3个主要产区 (河南、安徽、湖南) 共15份样品，利用紫外分光光度法，对半枝莲中的总黄酮进行含量测定，为快速评价半枝莲的质量以及开发半枝莲药材提供理论基础和科学依据。
1 仪器与材料 1.1 仪器紫外可见分光光度计TU-1901 (北京普析通用有限责任公司)；KQ-500DB型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)；TGL-185台式高速冷冻离心机 (长沙平凡仪器仪表有限公司)；RE-2000A旋转蒸发仪 (上海亚荣)；Finnpipette F3移液枪 (Thermo Scientific)；Q-4110石英狭缝比色皿 (无锡本色环保科技公司)；SHIMADZU UX620H电子天平 (日本岛津)；10ml、25ml、100ml容量瓶；50ml锥形瓶。
1.2 实验材料半枝莲分别来自15个不同产地的干燥全草药材，粉碎成过四号筛的粉末，详细信息详见表 1。
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表 1 半枝莲样品来源信息 |
黄芩苷对照品 (中国药品生物制品检定所)；甲醇 (永大试剂，天津市永大化工有限公司，批号：20131012)；水，去离子水，购于杭州娃哈哈公司。
2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备精密称取，在105 ℃下干燥至恒重的黄芩苷对照品30 mg，置于200 ml的容量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，摇匀，配制成150μg/ml的黄芩苷对照品溶液。分别精密量取黄芩苷对照品溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0置于25 ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，配制成浓度为2.4、4.8、7.2、9.6、12μg/ml等系列浓度的对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备称取半枝莲粉末0.15g，分别置于10ml的容量瓶中，加入75%甲醇溶液10ml，超声提取1h，超声温度为40℃，提取液，10000rpm/min离心，移取0.6ml提取液置10ml的容量瓶，定容至刻度，即得供试品溶液。
2.3 最大吸收波长的确定采用黄芩苷对照品溶液 (7.2μg/ml)，紫外分光光度计扫描 (220~600nm)，确定最大吸收峰波长在277nm处，所以选择277nm作为检测波长。
2.4 线性关系考察分别精密量取黄芩苷对照品溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml置于25ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为2.4、4.8、7.2、9.6、12μg/ml等系列浓度的对照品溶液，用甲醇作为空白。测定吸光度 (Abs)，以吸光度为纵坐标，以浓度 (C) 为横坐标，得到回归方程为：C=0.01593×(Abs)+0.00016，r=0.9997，在2.4~12μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验采用黄芩苷对照品溶液 (7.2μg/ml)，在277nm波长处，连续测定6次，获得吸光度值，带入标准曲线计算含量，结果RSD=1.06% (n=6)，表明该方法精密度良好，可以满足含量测定的要求。
2.6 稳定性试验将半枝莲样品，按照“2.2项下”方法制备供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、8、12、24h，在277nm波长处，测定获得吸光度值，代入标准曲线计算含量，结果RSD均小于1.01%，表明供试品溶液，在室温放置24h稳定性。
2.7 加样回收率试验精密称取半枝莲样品6份，每份各0.05g，分别精密加入黄芩苷对照品溶液 (150μg/ml) 各4ml，置于通风橱下，待溶液挥干，按照“2.2项下”供试品溶液制备方法处理后，测定紫外吸光度值，带入标准曲线，结果回收率在94.3%~96.8%范围内，RSD小于1.10%，表明该方法能够较好的对黄酮类成分进行含量测定准确度较高。
2.8 样品中的总黄酮含量测定取不同产地的半枝莲样品15份，按照“2.2项下”方法制备供试品溶液，在277nm波长处，测定紫外吸光度值，带入相应的线性回归方程计算浓度，结果见图 1。
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图 1 不同产地半枝莲中总黄酮的含量 |
采用紫外分光光度法对半枝莲中的总黄酮含量的测定，方法简单、准确、快捷。此次实验通过检测15个不同产地的半枝莲药材，比较不同产的半枝莲中总黄酮的含量差异，可以用来作为半枝莲质量评价参考依据。实验结果显示，不同产地的药材总黄酮含量有明显差异。15个不同产地半枝莲总黄酮含量分别为2.70%、1.85%、2.18%、2.36%、2.29%、2.30%、1.64%、1.99%、2.42%、2.22%、0.97%、1.99%、1.44%、2.11%、2.56%。由实验结果可见1号地区含量最高，11号地区含量最低。原因可能是半枝莲产地的土壤、气候、光照等多种因素导致总黄酮含量的差异，其中1、4、6、13号产地含量比较高，由于半枝莲中的总黄酮化合物是临床疗效的主要有效成分，因此在药材采购、药理研究时应在选择含量较多的地区药材从而控制半枝莲的质量稳定性。
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